Sinh học cơ bản cho sinh viên và sau đại học chương 8

Được đăng lên bởi nobenprize
Số trang: 12 trang   |   Lượt xem: 678 lần   |   Lượt tải: 0 lần
Chapter 8

Recombinant DNA Technology
Detailed Lecture Outline
DNA Cloning

Restriction Enzymes
(Figure 8.1 and Table 8.1).

(Figure 8.2).

(Figure 8.3).

Cloning Vectors and DNA Cloning
Plasmid Cloning Vectors
1. Several types of cloning vectors have been constructed, each with different 
molecular properties and cloning capacity.
2. Plasmid cloning vectors are derived from natural plasmids

3. An example of a typical E. coli cloning vector is pUC19 (2,686bp). The pUC19 
plasmid features (Figure 8.4):

4. DNA can be inserted into a cloning vector by restriction digestion and then 
ligation (Figure 8.5).

5. If one enzyme is used in cloning, two orientations are possible for the insert. 

6. Many plasmid cloning vectors are available, 

7. Plasmid cloning vectors are available for many prokaryotic and eukaryotic 

8. Size of the insert DNA is limited in plasmid cloning vectors.

Shuttle Vectors

Expression Vectors

Artificial Chromosomes
1. Cloning vectors that can accommodate very large pieces of DNA produce 
molecules resembling small chromosomes. Two examples are YACs and BACs.

Yeast Artificial Chromosomes (YACs)
1. YAC vectors function as artificial chromosomes in yeast. Their features include 
(Figure 8.6):

2. Several hundred kb of insert DNA can be cloned in a YAC. However, frequent 
RNA rearrangements in the host make YACs unsuitable for genome sequencing.
3. YAC clones are made by:

Bacterial Artificial Chromosomes (BACs)

Recombinant DNA Libraries

Genomic Libraries
1. A genomic library is used to isolate and study a cloned DNA containing a 
sequence of interest. Genomic libraries of eukaryotic DNA are constructed by 
digesting genomic DNA with a restriction enzyme, and ligating into a vector 
that can accommodate the genome in a manageable number of clones.
2. There are three general ways to produce genomic libraries:

3. The number of clones needed for a complete library can be calculated based on the
size of the genome and the average size of DNA inserted into the vector. In 
practice, a library should contain many times more than the calculated minimum 
number of clones.

Chromosome Libraries
1. Screening the genomic library of an organism with a large genome is laborious. 
Screening time can be reduced if a gene has been localized to a chromosome, by 
examining a library made from only that chromosome. Humans, for example, have
24 different chromosome libraries (22 autosomes, X and Y).
2. Separating chromosomes so that they ...
C h a p t e r 8
Recombinant DNA Technology
Detailed Lecture Outline
DNA Cloning
Restriction Enzymes
(Figure 8.1 and Table 8.1).
(Figure 8.2).
(Figure 8.3).
Sinh học cơ bản cho sinh viên và sau đại học chương 8 - Trang 2
Để xem tài liệu đầy đủ. Xin vui lòng
Sinh học cơ bản cho sinh viên và sau đại học chương 8 - Người đăng: nobenprize
5 Tài liệu rất hay! Được đăng lên bởi - 1 giờ trước Đúng là cái mình đang tìm. Rất hay và bổ ích. Cảm ơn bạn!
12 Vietnamese
Sinh học cơ bản cho sinh viên và sau đại học chương 8 9 10 982